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細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 | 性能檢測(cè)篇

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 | 性能檢測(cè)篇
貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)  2024-05-27  |  閱讀:827

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細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)于做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的老師而言,可以算是最簡(jiǎn)單又常用的分析儀器之一了。但看似簡(jiǎn)單的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,也可能讓使用者為之抓狂。

曾收到一位做工藝開(kāi)發(fā)的老師反饋,他使用的一款細(xì)胞計(jì)數(shù)儀三次檢測(cè)同一個(gè)樣品,每次分析結(jié)果和平均值的偏差都超出正常可接受范圍。

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這么簡(jiǎn)單的儀器為何會(huì)出現(xiàn)這種問(wèn)題

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是否是儀器本身的性能問(wèn)題

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在此,我們希望通過(guò)本文對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性介紹,以及如何檢測(cè)來(lái)幫助老師排查使用的儀器性能。對(duì)于性能不達(dá)標(biāo)的老儀器,就可以考慮設(shè)備的更新了。





關(guān)于重復(fù)性和準(zhǔn)確性,我們可以通過(guò)下圖所示的Precision和Accuracy來(lái)理解。如果重復(fù)性好,那連續(xù)幾次測(cè)試結(jié)果比較集中,與平均值相比的偏差都比較小。而準(zhǔn)確性則是和真實(shí)值進(jìn)行比較,多次測(cè)試結(jié)果和真實(shí)值的偏差越小,說(shuō)明測(cè)試準(zhǔn)確性越好。




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如果您手頭已有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在使用,如何來(lái)判定這款細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的重復(fù)性和準(zhǔn)確性呢?


根據(jù)《定量細(xì)胞計(jì)數(shù)方法性能的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)分析(ISO20391-2:2019)》一文中,關(guān)于細(xì)胞計(jì)數(shù)方法性能判定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),建議至少做4個(gè)濃度梯度,每個(gè)濃度梯度至少做3次重復(fù)性測(cè)試。我們可以考慮使用該方法來(lái)評(píng)判手上細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的性能好壞,具體的細(xì)胞選擇和樣品制備上可以參考ISO20391-2:2019里面的具體描述。

在此,我們拿Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和另一款半自動(dòng)插板式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀分別進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性的性能評(píng)估。

這里檢測(cè)用到的是一種腫瘤細(xì)胞,按4個(gè)濃度梯度稀釋?zhuān)ㄔ海?倍,5倍和10倍稀釋?zhuān)⑶颐總€(gè)濃度做3組重復(fù)性檢測(cè),以下是測(cè)試得到的結(jié)果和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。


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針對(duì)同一個(gè)樣品的4個(gè)不同稀釋倍數(shù)和3組重復(fù)性檢測(cè),同時(shí)使用半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(通常需要使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板作為載體,同時(shí)臺(tái)盼藍(lán)染色需要手動(dòng)完成)檢測(cè)是怎樣的效果呢?如下表所示是一款半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上檢測(cè)得到的數(shù)據(jù)。


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由于半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀裝機(jī)后很久未做過(guò)標(biāo)樣的驗(yàn)證和校準(zhǔn),所以和全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的測(cè)試結(jié)果之間的差異在此不做比較分析。

為了能比較得出這兩臺(tái)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的重復(fù)性和準(zhǔn)確性的性能水平,我們將每臺(tái)儀器3次原液檢測(cè)(編號(hào):S3-原液)得到的活細(xì)胞密度平均值作為“真值”。那么Vi-CELL BLU得到的“真值”是3.44M,而半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀得到的“真值”是3.06M。而其他3個(gè)稀釋倍數(shù)下計(jì)算得到的平均結(jié)果,都分別和這個(gè)“真值”進(jìn)行比較,并且計(jì)算得到相對(duì)偏差。

通過(guò)分析我們可以看到隨著S3樣品的稀釋倍數(shù)不斷增加,Vi-CELL BLU的活細(xì)胞密度平均值偏差也逐漸變大,但都在±10%的偏差范圍內(nèi)。同時(shí)每個(gè)稀釋倍數(shù)下的3次重復(fù)性檢測(cè)RSD都小于5%,顯示出良好的測(cè)試結(jié)果重復(fù)性。

而半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)5倍和10倍稀釋的樣品檢測(cè),3次測(cè)試結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差已經(jīng)大于10%,并且稀釋10倍的活細(xì)胞密度平均值和原液“真值”結(jié)果比較,偏差達(dá)到了15.03%。所以,半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的重復(fù)性檢測(cè)上相對(duì)要差很多,并且隨著稀釋倍數(shù)增加,檢測(cè)得到的結(jié)果和原液結(jié)果之間的偏差加大。

通過(guò)以上這種性能檢測(cè)方法,我們可以得出無(wú)論是在3次測(cè)試的重復(fù)性,還是梯度稀釋結(jié)果的準(zhǔn)確性,Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀都比半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀更有優(yōu)勢(shì)。如果您對(duì)自己使用的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀性能感興趣,也可以嘗試用這個(gè)方法來(lái)檢測(cè)判斷。






至于為何Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在重復(fù)性檢測(cè)和梯度稀釋的測(cè)試準(zhǔn)確性上,都比半自動(dòng)插片式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀更有優(yōu)勢(shì)?下一期的內(nèi)容,我們將針對(duì)這個(gè)問(wèn)題為您做具體的介紹。




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