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新型益生菌高通量厭氧發(fā)酵技術(shù)及應(yīng)用

新型益生菌高通量厭氧發(fā)酵技術(shù)及應(yīng)用
貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)  2024-11-29  |  閱讀:992

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益生菌是活細(xì)菌,對(duì)人體具有促進(jìn)健康和發(fā)揮生物功能的作用。它們通常用于增加腸道所需微生物的數(shù)量,譬如在抗生素治療后促進(jìn)腸道菌群再生。這就是益生菌或益生菌營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑市場(chǎng)大幅度增長(zhǎng)的原因之一1。人體腸道菌群及其健康促進(jìn)作用的研究對(duì)營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)業(yè)尤為重要。因此,完全有必要對(duì)厭氧或微量需氧培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行科學(xué)研究,比如在類(lèi)似這些微生物的生長(zhǎng)條件下培養(yǎng)益生菌。


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雙歧桿菌


益生菌包括一系列厭氧菌,如乳酸菌或雙歧桿菌。在各種益生菌中,雙歧桿菌是應(yīng)用和研究最廣泛的益生菌菌種之一。由于它們無(wú)法在有氧培養(yǎng)條件下進(jìn)行氧呼吸和生長(zhǎng),因此被歸類(lèi)為嚴(yán)格厭氧菌2。雙歧桿菌是人體腸道優(yōu)勢(shì)微生物群的主要成員3。它們通過(guò)釋放乳酸和乙酸,在pH控制方面起著重要的作用,這一點(diǎn)限制了許多潛在致病菌的生長(zhǎng)4。母乳喂養(yǎng)的嬰兒腸道內(nèi)雙歧桿菌為優(yōu)勢(shì)菌種,占腸道微生物的80%以上1,5


BioLector XT 新一代高通量微型生物反應(yīng)器是一款用于微生物培養(yǎng)高通量篩選的臺(tái)式設(shè)備,可進(jìn)行好氧、微氧和嚴(yán)格厭氧培養(yǎng)。在培養(yǎng)的過(guò)程中可進(jìn)行補(bǔ)料和pH控制,還可在線監(jiān)測(cè)常見(jiàn)的培養(yǎng)參數(shù),如生物量、pH值、溶氧(DO)和各種熒光分子或蛋白質(zhì)的熒光強(qiáng)度。為了實(shí)現(xiàn)高通量,BioLector XT在SBS/SLAS標(biāo)準(zhǔn)化微孔板(每板48個(gè)孔)上進(jìn)行培養(yǎng),這樣即可在一臺(tái) BioLector XT 微型生物反應(yīng)器中同時(shí)處理多達(dá)48個(gè)樣品。下面案例,我們使用BioLectorXT對(duì)益生菌兩岐雙岐桿菌進(jìn)行厭氧分批培養(yǎng)和補(bǔ)料分批培養(yǎng),展示其操作的簡(jiǎn)單易用性和可行性。


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1應(yīng)用案例

菌種:兩岐雙岐桿菌

實(shí)驗(yàn)方案:pH調(diào)控下的分批發(fā)酵 & 補(bǔ)料分批發(fā)酵(氣體出口外接第三方O2傳感器)

實(shí)驗(yàn)條件:溫度37 °C, 振搖速度600 rpm, N2 30 mL/min,圓孔板


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兩歧雙歧桿菌補(bǔ)料分批培養(yǎng)條件


2實(shí)驗(yàn)結(jié)果


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?  補(bǔ)料分批培養(yǎng)指數(shù)生長(zhǎng)期比分批培養(yǎng)長(zhǎng),生物量達(dá)到227.3 a.u. 分批培養(yǎng)為147.57 a.u.

?  兩岐雙岐桿菌生長(zhǎng)過(guò)程分泌乳酸,為保持pH6,補(bǔ)料分批培養(yǎng)添加193.56 μL 3 M NaOH,分批發(fā)酵添加約50 μL

?  按30mL/min 流量連續(xù)充入N2,DO穩(wěn)步下降至0%。16以及23 h,外置氧氣傳感器顯示氧濃度為 0.029%


3結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了使用 BioLector 進(jìn)行高通量厭氧發(fā)酵的實(shí)用性。這項(xiàng)新技術(shù)可以取代攪拌罐生物反應(yīng)器和搖瓶中的大量實(shí)驗(yàn),從而顯著降低厭氧微生物發(fā)酵研究的復(fù)雜性和工作量。除了能夠以高通量方式研究大量克隆或培養(yǎng)基外,該系統(tǒng)還通過(guò)非侵入性在線測(cè)量同時(shí)提供有關(guān)生物量生長(zhǎng)和pH值的詳細(xì)過(guò)程數(shù)據(jù),也可以進(jìn)行pH控制和補(bǔ)料,這些能力的結(jié)合在傳統(tǒng)的生物反應(yīng)器中并不常見(jiàn)。


參考文獻(xiàn):

Ku S, Park MS, Ji GE, You HJ. Review on Bifidobacterium bifidum BGN4: Functionality and nutraceutical applications as a probioticmicroorganism. Int J Mol Sci. 2016;17(9):1544. 

2. Shimamura S, Abe F, Ishibashi N, Miyakawa H, Yaeshima T, Araya T, Tomita M. Relationship between oxygen sensitivity and oxygenmetabolism of Bifidobacterium Species, Journal of Dairy Science, 1992, 75(12): 3296-3306. 

3. Sakurai T, Yamada A, Hashikura N, Odamaki T, Xiao JZ. Degradation of food-derived opioid peptides by bifidobacteria. Benef Microbes.2018; 9(4):675-682. 

4. Hidaka H, Eida T, Takizawa T, Tokunaga T, Tashiro Y, E_ects of Fructooligosaccharides on intestinal flora and human health. BifidobacteriaMicroflora. 1986, 5(1), 37-50. 

5. Kato K, Odamaki T, Mitsuyama E, Sugahara H, Xiao JZ, Osawa R. Age-related changes in the composition of gut Bifidobacterium species.Curr Microbiol. 2017;74(8):987-995. 

6. Hill D, Sugrue I, Tobin C, Hill C, Stanton C and Ross RP (2018) The Lactobacillus casei group: History and health related applications. Front.Microbiol. 9:2107. 

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