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紫外專欄 | 救命!祖。。傳的DNA要熱化了

紫外專欄 | 救命!祖。。傳的DNA要熱化了
東南科儀  2022-07-12  |  閱讀:848

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蟬鳴聲聲入夏來,烈日高照,暑氣炎炎,歡迎來到一年一度的人間大火爐時節——夏季。夏天,我們享受著天然免費的汗蒸和干蒸,不僅大腦熱到顫抖,連DNA都要化了,離變異也不遠了。

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冇使驚,冰凍西瓜、冰可樂、雪糕刺客、空調……解暑降溫神器紛紛登場,救我一命。勇敢的朋友還可以剃個光頭過個清涼的夏天。

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綜上可見,生物對溫度的變化是很敏感的,溫度的變化影響著世間萬物。從古至今,對于溫度的控制和熱量的利用,也在人類生活生產中扮演了至關重要的角色。在生命科學研究領域,溫度是實驗中非常重要的一個參數。例如,使用紫外法測定DNA熔解溫度(Tm就是一項非常經典的需要樣品控溫的實驗。
DNA 的變性的特點是爆發式的, 變性作用發生在一個很窄的范圍。通常把DNA 的雙螺旋結構失去一半時的溫度稱為該DNA 的熔點或熔解溫度( melting temperature ) , 用Tm 表示。DNA 的Tm 值一般在70~85 ℃之間。DNA的變性從開始解鏈到完全解鏈,是在一個相當小的溫度范圍內完成的,一系列物化性質也發生改變: 260 nm 區紫外吸收值增高(增色效應) , 粘度降低, 浮力密度降低等。所以,我們可以利用紫外可見分光光度計檢測DNA樣品在260nm處吸光度隨溫度的變化,對解鏈過程進行監測。

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不同種類DNA的Tm值不同:G-C 的含量越高, Tm 越高(由于鳥嘌呤-胞嘧啶(G≡C)核苷酸之間有3個氫鍵,而腺嘌呤-胸腺嘧啶(A=T)之間有2個氫鍵,G≡C核苷酸解離所需能量大于A=T堿基對所需能量。), 由Tm 值可推算出GC含量。其經驗公式為: ( G-C)% = ( Tm - 69.3 ) ×2.44
在以下示例實驗中,使用梅特勒-托利多紫外可見分光光度計UV7配備酷T(CuveT)恒溫器,測定20℃-95℃升溫范圍內鮭魚精DNA在260nm處的吸光度變化,以監測其變性過程。我們用各溫度點測得的吸光度繪制圖譜,可得到一條溫度-吸光度S形曲線,如下圖所示:

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圖:260nm處鮭魚精DNA的熔解曲線(案例來源梅特勒公眾號)
在此實驗案例中,鮭魚精DNA的Tm值通過確定S形曲線的拐點來確定。經測定和計算,鮭魚精DNA的Tm值為64.4℃,說明其G≡C堿基對的濃度相對較低。確定熔解溫度的另外一種方法是用切線法對S形曲線的拐點進行圖形化評估。

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我司已為廣大相信光的實驗奧特曼準備好了應用秘笈成套裝備輕松應對需要對樣品進行溫控的紫外實驗。梅特勒-托利多超越系列紫外可見分光光度計可搭載酷T帕爾貼控溫系統或勞達(LAUDA)等水浴恒溫系統,實現對樣品精準快速的溫度控制:
梅特勒-托利多紫外可見分光光度計+酷T帕爾貼控溫系統方案:

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梅特勒-托利多紫外可見分光光度計+勞達(LAUDA)水浴溫控系統聯用方案:

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