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一、樣品前處理

1、所用試劑

必須使用重蒸餾水或與之等質的水（電導率＜10μs）

1.1 雙氧水,30%

1.2 甲酸，98-100%

1.3 苯酚：須重蒸

1.4 偏重亞硫酸鈉

1.5 氫氧化鈉

1.6 鹽酸，ρ＝1.18g/ml

1.7 水解劑：6mol/l 的HCL，1L含1g苯酚；加1g苯酚（3.3）到492mL鹽酸(3.7)中，然后用水定容至1L

1.8 20種氨基酸標準品

2、標樣配置

氨基酸混合標準儲備液：稱取上述各氨基酸標樣使用PH2.2的Load Buffer配置成2.5umol/L的儲備液備用。

取氨基酸混合標準儲備液與PH2.2的Load Buffer以1:9的比例配置成0.25umol/L的標準液。

3、前處理設備

1)  天平

2)  水解管

3)  量筒

4)  無油真空泵

5)  干浴水解、濃縮儀

6)  移液管

7)  0.45um濾膜

4、樣品制備（參考歐盟飼料指令98/64/EC ）

1)  樣品的準備

粉碎樣品，通過0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質石油（3.12）脫脂。

2)  氧化

從準備好的樣品中稱取約0.1~1克樣品，準確到0.2mg，于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中，稱取的樣品應該含有大約10mg氮，水分不能超過100mg。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃，加5ml氧化試劑（過甲酸苯酚），用帶彎頭的玻璃刮勺混合。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中，放置16小時。之后，從冰箱中取出，加0.84克偏重亞硫酸鈉（3.4）來分解過量的氧化試劑。

3)  水解

加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應瓶放在烘箱中，溫度控制在110攝氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水解1小時。然后快速旋緊瓶塞（戴手套和護眼罩）將其繼續在烘箱110攝氏度下水解23小時。

4)  加入內標并且調節pH值到2.20

當水解反應結束后，將反應瓶從烘箱中取出，并且打開瓶口（戴手套和護目鏡）。冷卻后用定量加樣器準確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標準溶液，混合并且轉移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實驗燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調節到pH為正好2.20。

轉移一部分溶液（不需要全部）到50毫升有蓋子的塑料瓶中。可以馬上測定或者放入冰箱等到分析的時候測定。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析儀分析方法參數：

1)  色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6x20cm

2)  分離程序：

3)  運行時間：分析時間65min

4)  反應單元溫度：135°C。

5)  檢測波長：570nm、440nm同時檢測。

三、外標法定量

附、豆粕A分析圖譜

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